Olio per immersione: composizione, caratteristiche, fondazione e uso

L'olio per immersione è un liquido viscoso e trasparente che ha un alto indice di rifrazione. Per questo motivo è ampiamente utilizzato nelle osservazioni microscopiche, poiché fornisce la proprietà di concentrare la luce quando passa attraverso l'obiettivo 100X del microscopio, aumentando il suo potere risolutivo.

Ciò avviene a causa della formazione di un film viscoso tra il target e lo striscio, impedendo ai raggi luminosi di disperdersi quando raggiungono l'aria, concentrando i fasci di luce verso il campione.

L'olio ad immersione è usato solo con l'obiettivo 100X. Questo è il motivo per cui l'obiettivo 100X è anche chiamato obiettivo di immersione. Il resto è noto come obiettivi secchi. Questo obiettivo non può essere usato senza l'olio di immersione, perché senza di esso la visualizzazione non sarebbe soddisfacente.

La funzione principale dell'olio di immersione è quella di fornire immagini più chiare, più nitide e definite, consentendo l'osservazione di dettagli che non sarebbero possibili con altri obiettivi.

Il primo olio utilizzato per questo scopo era l'olio di anice, utilizzato in combinazione con la prima lente ad immersione creata da Giovanni Battista Amici. Questo evitò solo l'aberrazione cromatica, ma non aumentò l'apertura numerica del sistema di lenti.

Quindi fu usato l'olio di cedro, ma presentava molti svantaggi che ne costrinsero il disuso. Tra questi c'era la sua alta acidità, che ha danneggiato gli obiettivi a breve termine.

Successivamente, sono state utilizzate altre sostanze come acqua e glicerina fino a quando non sono stati creati gli oli sintetici di immersione, che sono stati gradualmente raffinati fino a raggiungere l'attuale olio di immersione, che è un composto complesso di sostanze organiche.

Composizione di olio per immersione

L'olio di immersione è costituito da una miscela di composti organici quali: terfenile, terfenile idrogenato, idrocarburi naturali e polibuteni.

Caratteristiche dell'olio per immersione

L'olio di immersione è un liquido giallo chiaro, dall'aspetto leggermente viscoso, con un odore e una densità caratteristici tra 0, 92 e 0, 99 g / cm3.

L'olio di immersione non è solubile in acqua e ha un punto di ebollizione di 340 ° C. L'indice di rifrazione a (n 20 ° C / D): varia da 1.482 a 1.516. In quanto, l'indice di infiammazione è di 110 ° C e la viscosità oscilla tra 100 e 120 mPa.s.

Questo prodotto deve essere smaltito correttamente, poiché è ecotossico. Cioè, è dannoso per l'ambiente, colpendo principalmente gli animali acquatici. D'altra parte, è irritante per la pelle e le mucose. Se ingerito, è nefrotossico e cardiotossico.

L'olio di immersione è stabile a 15-25 ° C, temperatura alla quale deve essere conservato.

Nozioni di base sull'olio per immersione

Quando si usano lenti ad alto ingrandimento, l'intensità della luce dovrebbe essere aumentata. Tuttavia, molti dei fasci di luce vengono persi perché sono dispersi quando raggiungono l'aria (spazio tra il coprioggetto e la lente) e anche alcuni raggi subiscono una riflessione totale.

L'olio di immersione ha un indice di rifrazione simile a quello del vetro. Pertanto, quando l'olio viene a contatto tra la lente 100X e il vetrino coprioggetto, i fasci di luce sono concentrati.

I raggi concentrati attraversano il campione e aumentano la nitidezza dell'immagine, ovvero aumentano l'apertura numerica dell'obiettivo e correggono le aberrazioni cromatiche e sferiche.

Usi o applicazioni

L'uso di olio per immersione è particolarmente necessario quando è necessario osservare un'immagine in modo più ampio, utilizzando l'obiettivo di maggiore ingrandimento (obiettivo di 100X) e quindi essere in grado di vedere i dettagli che sono essenziali per stabilire una diagnosi.

Pertanto, è ampiamente utilizzato negli studi al microscopio di varie aree quali: istologia, citologia, ematologia e batteriologia. Ad esempio, è utile per studiare le caratteristiche delle cellule e dei tessuti di un paziente.

Serve anche per l'analisi degli strisci di sangue, dove vogliamo dettagliare le caratteristiche degli emoparassiti all'interno e all'esterno degli eritrociti, così come nei preparati Gram, per definire le caratteristiche morfotintoriali dei microrganismi.

Di solito viene utilizzato in preparazioni fisse, in quanto non è raccomandato nei preparati freschi. Questo perché la tensione superficiale dell'olio provoca il movimento del vetrino coprioggetto, che provoca il movimento del campione durante la sua osservazione e ne impedisce l'analisi.

D'altra parte, l'olio per immersione non è utile solo nella microscopia ottica convenzionale: è anche usato nei microscopi a fluorescenza a riflessione interna totale (TIRFM) e nelle applicazioni di fluorescenza confocale.

Passi per osservare una preparazione usando olio per immersione

Per vedere una preparazione al microscopio, concentrarsi innanzitutto sulla preparazione con l'obiettivo di ingrandimento inferiore, solitamente 10X, con bassa intensità luminosa.

Quindi viene passato l'obiettivo di 40X e il passaggio della luce è leggermente aumentato. Alcune analisi possono essere fatte con questo aumento, ma per vedere i dettagli strutturali è necessario l'ingrandimento 100X.

Prima di passare all'obiettivo 100X, una goccia di olio per immersione viene posizionata sul vetrino, proprio dove si desidera osservarla, e quindi la pistola del microscopio si sposta per individuare l'obiettivo 100x nella preparazione.

L'intensità della luce è regolata (aumenta) (spostando il condensatore e aprendo il diaframma). Quindi, con alcuni piccoli movimenti che vengono dati alla vite micrometrica (avanti o indietro), si dovrebbe mettere a fuoco perfettamente se il microscopio utilizza obiettivi parafocali.

Se si tenta di focalizzare la preparazione direttamente con l'obiettivo di immersione, potrebbero esserci problemi nel trovare la messa a fuoco. Non è un'azione impossibile, ma la difficoltà aumenta in modo significativo.

cura

Per utilizzare l'olio da immersione, devono essere prese in considerazione determinate condizioni.

Quando è stata preparata una preparazione colorata, ad esempio uno striscio macchiato con Giemsa o un Grammo, è necessario attendere che lo striscio si asciughi completamente prima di posizionare l'olio per immersione. Altrimenti, l'olio insieme all'acqua formerà micelle che non permetteranno di visualizzare la preparazione.

D'altra parte, dopo aver osservato il lotto di preparati, cioè alla fine della giornata lavorativa, l'obiettivo 100X deve essere accuratamente pulito, utilizzando una carta per lenti a base di etanolo. Se l'obiettivo viene lasciato sporco, l'olio si asciugherà e quindi sarà molto difficile rimuoverlo, danneggiando il campo visivo.

Allo stesso modo, bisogna tenere conto del fatto che l'olio è infiammabile e deve essere tenuto lontano da fonti di calore (accendini). È importante evitare di riscaldarlo oltre i 65 ° C.

Infine, l'olio è un prodotto tossico. Pertanto, il contatto diretto con la pelle e le mucose dovrebbe essere evitato, dove può causare lieve irritazione. Per evitare incidenti, si consiglia l'uso di guanti e occhiali di sicurezza per manipolarlo.

In caso di contatto con l'olio, l'area deve essere lavata con abbondante acqua. Se l'olio schizza negli occhi, dovrebbe essere lavato nello stesso modo, mantenendo gli occhi aperti. In caso di ingestione accidentale, è importante bere acqua calda e indurre il vomito, oltre ad andare dal medico più vicino.