Cross test: per cosa servono, tecnica e fondamento, fasi

I test incrociati sono una serie di studi di laboratorio che vengono eseguiti per determinare se i prodotti sanguigni di un donatore (principalmente sangue intero e concentrato globulare) sono compatibili con il sangue del ricevente.

È un test complementare oltre alla compatibilità ABO e al fattore Rh. La ragione per il test incrociato è che a volte due individui (donatore-ricevente) possono avere lo stesso gruppo ABO e Rh, ma il loro sangue è ancora incompatibile.

Tale incompatibilità è dovuta alla presenza di anticorpi contro una serie di proteine dei globuli rossi noti come antigeni minori. Questi antigeni non vengono regolarmente valutati come si fa con il gruppo sanguigno (ABO) e il fattore Rh.

Questo perché gli antigeni minori sono molto meno frequenti e hanno un'espressione variabile in ogni individuo, quindi è praticamente impossibile raggrupparli in categorie come è fatto con il fattore gruppo e Rh.

Invece, i globuli rossi donatori vengono miscelati con il siero del paziente (test di compatibilità maggiore) e i globuli rossi del paziente con siero di donatore (test di compatibilità minore) al fine di rilevare la presenza di reazioni antigene-anticorpo.

Quando ci sono anticorpi contro antigeni minori, nel siero del paziente o del donatore, il test è positivo, quindi nella maggior parte dei casi quella particolare unità di sangue non può essere trasfusa.

Gruppo ABO

Per comprendere bene che le reazioni incrociate vengono trattate per prime, è necessario conoscere le basi sui gruppi sanguigni.

In questo senso, la cosa più importante è sapere che il sangue può essere classificato in quattro gruppi: A, B, AB e O.

Ciascuno di questi gruppi esprime sulla superficie dei globuli rossi una particolare proteina (antigene), che viene identificata come elemento estraneo dagli anticorpi di un potenziale recettore di un gruppo diverso.

La più sorprendente delle reazioni antigene-anticorpo nella compatibilità del sangue è che non è richiesta alcuna precedente esposizione all'antigene per la presenza di anticorpi. Questo è noto come anticorpi naturali.

Anticorpi naturali

Generalmente, poiché gli anticorpi esistono nel corpo di un individuo, è necessario che i globuli bianchi siano stati precedentemente esposti all'antigene.

Ciò significa che al primo contatto tra l'antigene estraneo e l'organismo non ci sono anticorpi, poiché questi vengono generati successivamente, dopo il contatto iniziale. Pertanto, è impossibile per il sistema immunitario avere anticorpi contro ad esempio un particolare virus, se non è stato esposto ad esso in passato.

L'unica eccezione a quanto sopra è l'antigene anti AB. In questi casi, la persona ha anticorpi contro l'antigene che i loro globuli rossi non hanno nemmeno se non sono mai stati in contatto con i globuli rossi di un'altra persona. Questo è noto come anticorpi naturali.

Antigeni e anticorpi legati al gruppo sanguigno

I gruppi sanguigni sono determinati nel caso del sistema ABO dalla presenza di antigeni specifici (A o B) nella membrana dei globuli rossi e, al contrario, anticorpi contro l'antigene assente nella membrana degli eritrociti.

Pertanto, una persona con gruppo sanguigno A esprime antigene A sulla superficie dei suoi globuli rossi, mentre nel siero ci sono anticorpi anti-B.

Al contrario, nei pazienti del gruppo B viene trovato l'antigene B, mentre gli anticorpi sono anti-A.

Ora, i pazienti con sangue AB hanno entrambi antigeni A e B. Pertanto, non ci sono anticorpi, poiché così facendo si distruggerebbero i globuli rossi di quella persona.

L'opposto si verifica nel gruppo O, dove la membrana dell'eritrocito non presenta nessuno dei due antigeni (né A né B), mentre nel siero sono presenti anticorpi anti-A e anti-B.

Incompatibilità gruppo ABO

Da quanto sopra, la compatibilità dei gruppi sanguigni ABO può essere facilmente dedotta, dal momento che l'antigene della membrana eritrocitaria è automaticamente noto anticorpi nel siero. Così:

- Il sangue A è compatibile con il gruppo A e il gruppo O.

- Il gruppo sanguigno B è compatibile con il sangue B e O.

- Le persone con il gruppo O possono ricevere solo sangue O (poiché hanno anticorpi anti-A e anti-B), sebbene il loro sangue sia ricevuto da tutti gli altri gruppi senza problemi poiché manca di antigeni.

- Finalmente. Coloro che hanno un gruppo sanguigno AB possono ricevere sangue da tutti gli altri gruppi (A, B, O e, naturalmente, AB), poiché non hanno anticorpi contro nessuno degli antigeni. Tuttavia, solo le persone AB possono ricevere il sangue AB, poiché tutti gli altri gruppi hanno anticorpi che potrebbero distruggere questi globuli rossi.

Antigeni minori

Come con i gruppi ABO, una serie di proteine che funzionano come antigeni si possono trovare sulla superficie degli eritrociti, come nel caso degli antigeni del gruppo ABO.

Tuttavia, questi antigeni non si verificano in tutti gli individui. La sua combinazione è eterogenea e la penetranza (livello di espressione della proteina) è variabile, quindi è impossibile classificarla in gruppi come quello che esiste per ABO e Rh. Da lì, deriva il suo nome da "antigeni minori", noto anche come "antigeni a bassa incidenza".

Sebbene non siano frequenti, potrebbero esserci anticorpi naturali contro antigeni minori. Tra questi i più comuni sono Lewis, MNS, anti N, Kell, Duffy, anti Fyb e Kidd. Tutti loro sono responsabili di reazioni emolitiche e post-trasfusionali molto gravi.

Inoltre, potrebbero verificarsi casi di sensibilizzazione contro antigeni minori mediante il contatto preventivo, sia con dette proteine antigeniche dovute a trasfusioni precedenti sia a causa di immunità crociata.

Immunità incrociata

Si dice che esiste un'immunità incrociata quando due antigeni di due diverse fonti (ad esempio un globulo rosso e un batterio) sono molto simili, al punto che gli anticorpi contro una di dette proteine antigeniche reagiscono anche con l'altro perché sono quasi identici .

Per capirlo meglio, prendi il precedente esempio ipotetico (antigeni di un globulo rosso e batteri). In nessuno dei due casi esistono anticorpi naturali, ma se una persona è esposta ai batteri, genererà anticorpi contro di essa.

Tali anticorpi reagiranno più tardi contro un globulo rosso se gli antigeni di questo sono molto simili a quelli dei batteri che hanno indotto la formazione degli anticorpi.

Se ciò accade, i globuli rossi con quella particolare proteina antigenica non possono essere somministrati alla persona che ha gli anticorpi, in quanto ci sarebbe il rifiuto. Qui sta l'importanza delle reazioni incrociate.

A cosa servono i test incrociati?

Poiché è impossibile caratterizzare il sangue di individui diversi in gruppi sulla base degli antigeni minori, l'unico modo per sapere se nel sangue di una persona ci sono anticorpi contro gli antigeni minori dei globuli rossi di un altro è attraverso i test incrociati .

In quei casi in cui gli anticorpi sono presenti, si innesca una reazione di emolisi o agglutinazione, quindi si conclude che la reazione è stata positiva; cioè, ci sono anticorpi contro antigeni minori (anche se non si sa esattamente cosa). Altrimenti, il test è negativo.

fondazione

I test incrociati si basano sulla reazione antigene-anticorpo. Pertanto, con essi è possibile rilevare se nel siero di un recettore ci sono anticorpi contro gli antigeni dei globuli rossi del donatore (o viceversa) che inducono una reazione antigene-anticorpo.

Se non ci sono anticorpi, non si verifica alcuna reazione e il test è segnalato come negativo. Viceversa, se la reazione è positiva (c'è emolisi o agglutinazione durante il test) si può concludere che gli anticorpi sono presenti.

A questo proposito, è importante notare che potrebbero esserci anticorpi contro i globuli rossi nel siero del donatore e del ricevente. Questo è il motivo per cui esistono due tipi di reazioni incrociate.

Tipi di reazioni incrociate

È possibile che ci siano anticorpi contro gli eritrociti del donatore nel siero del paziente; ma potrebbe anche essere vero il contrario, cioè anticorpi nel siero del donatore contro i globuli rossi del paziente.

Questo è il motivo per cui esistono due tipi di test incrociati:

- Test incrociato maggiore.

- Prova incrociata minore.

Entrambi i tipi vengono eseguiti regolarmente nella banca del sangue prima di trasfondere i prodotti sanguigni, dato che se uno qualsiasi dei test è positivo, c'è un alto rischio di reazioni trasfusionali che possono mettere in pericolo la vita del paziente.

Maggiore cross test

In questo test, viene valutato se ci sono anticorpi contro i globuli rossi del donatore nel siero del ricevente.

Se ciò accade, i prodotti sanguigni non possono essere somministrati, poiché un gran numero di anticorpi presenti nel plasma del paziente distruggerà molto rapidamente i globuli rossi del donatore, generando reazioni catastrofiche nel corpo del ricevente nel processo. Queste reazioni sono così gravi che possono minacciare la tua vita.

Prova incrociata minore

In questo caso, viene determinato se ci sono anticorpi nel siero del donatore contro i globuli rossi del ricevente.

Se è così, gli anticorpi inizieranno a distruggere gli eritrociti del recettore. Tuttavia, poiché la quantità di anticorpi è limitata, la reazione è di minore intensità; anche se è ancora pericoloso.

fasi

Sia i test trasversali maggiori che minori sono divisi in tre fasi:

- Salina.

- Termico o incubazione.

- Coombs.

Nella prima fase, i globuli rossi e il siero sono mescolati in soluzione salina. Successivamente, viene aggiunta l'albumina e il campione viene incubato a 37 ° C per 30 minuti per procedere infine alla fase di coombs.

tecnica

La tecnica del test incrociato è relativamente semplice, dal momento che comporta l'aggiunta di globuli rossi donatori al siero del paziente (test cross-test principale) così come agli eritrociti destinatari del siero del donatore (test incrociato secondario).

Per indurre la reazione antigene-anticorpo in un tempo relativamente breve, è necessario seguire una serie di passaggi standardizzati. Questi passaggi sono riassunti in un modo semplificato di seguito.

È importante tenere presente che nella sezione seguente viene descritto il test di compatibilità maggiore, sebbene i passaggi siano gli stessi per il test di compatibilità minore, ma si scambino l'origine dei globuli rossi e del siero.